蚯蚓凍干機在藥材凍干機制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法！真空冷凍干燥技術簡稱凍干技術，是一項對食品護色、保鮮、保質的高新加工技術。目前廣泛用于果蔬、肉禽、水產、調味品、方便食品及名優特產等干燥，可達到保持食品原有的色、香、味、形、新鮮度不變的目的，且復水性特好，成品便于貯存和運輸，費用降低，保存期延長。在干燥蜂皇漿、人參、龜、鱉、蚯蚓等營養保健品，采用真空冷凍干燥工藝，更使人們相信該營養品純真自然。

 

真空凍(dong)干(gan)(gan)機制備蚯(qiu)蚓纖溶酶(mei)凍(dong)干(gan)(gan)粉的方法(fa)，其特征在于，包括如下步驟(zou)：

    步驟一、蚯蚓(yin)粗粉(fen)的(de)制(zhi)備(bei)：將活蚯蚓(yin)，饑餓(e)**，自然(ran)吐凈泥沙，洗滌，而后在溫(wen)度(du)介于2035℃的(de)通風條件干燥并制(zhi)成粉(fen)碎(sui)，通過100200目篩制(zhi)成蚯蚓(yin)粗粉(fen)；

    步驟二、粗(cu)酶(mei)溶(rong)液(ye)的(de)制備(bei)：取(qu)蚯蚓粗(cu)粉用(yong)2倍體積的(de)0.1mol/L，pH為(wei)7.8的(de)磷酸(suan)(suan)緩沖液(ye)PBS勻漿，加0.1mol/LNaCl溶(rong)液(ye)，置于(yu)(yu)4℃冰箱內過夜(ye)，然后以(yi)10000r/min，4℃離(li)(li)心(xin)15min，棄沉(chen)淀，取(qu)上清；上清液(ye)于(yu)(yu)50℃水浴保溫40min，流水冷(leng)卻，再(zai)(zai)8000r/min，4℃離(li)(li)心(xin)10min，取(qu)上清，在上清液(ye)中(zhong)(zhong)加硫酸(suan)(suan)銨達30％飽(bao)和(he)度，靜置3小(xiao)時，再(zai)(zai)8000r/min，4℃離(li)(li)心(xin)10min；收(shou)集上清液(ye)再(zai)(zai)加硫酸(suan)(suan)銨達70％飽(bao)和(he)度，靜置3小(xiao)時，再(zai)(zai)8000r/min，4℃離(li)(li)心(xin)10min，收(shou)集沉(chen)淀；將沉(chen)淀溶(rong)于(yu)(yu)上述緩沖液(ye)中(zhong)(zhong)，對上述緩沖液(ye)以(yi)載留5KD分子量的(de)透析袋(dai)透析過夜(ye)去鹽(yan)，再(zai)(zai)將透析液(ye)8000r/min，4℃離(li)(li)心(xin)10min，取(qu)上清液(ye)即為(wei)蚯蚓纖(xian)溶(rong)酶(mei)粗(cu)酶(mei)溶(rong)液(ye)；

       步驟三、粗酶的(de)(de)純化(hua)：將(jiang)蚯(qiu)蚓纖(xian)溶(rong)酶粗酶溶(rong)液(ye)(ye)過(guo)Sephadex G75凝膠層析，上柱(zhu)前(qian)預先(xian)用0.02mol/L，pH為(wei)7.8的(de)(de)磷酸緩(huan)沖液(ye)(ye)平衡(heng)，上柱(zhu)后(hou)用上述緩(huan)沖液(ye)(ye)洗(xi)(xi)脫(tuo)至在280nm波長(chang)無(wu)光吸收(shou)，洗(xi)(xi)脫(tuo)液(ye)(ye)出現2個蛋白峰(feng)(feng)，其中酶活(huo)性(xing)(xing)峰(feng)(feng)與(yu)第(di)(di)1個蛋白峰(feng)(feng)重疊，收(shou)集重疊部(bu)分(fen)(fen)的(de)(de)酶液(ye)(ye)，過(guo)DEAECellulose A52離(li)子交換柱(zhu)，過(guo)柱(zhu)前(qian)先(xian)用0.05mol/L，pH為(wei)7.8的(de)(de)PBS平衡(heng)；然(ran)后(hou)用含(han)00.5mol/L NaCl的(de)(de)PBS離(li)子強度線性(xing)(xing)梯(ti)度洗(xi)(xi)脫(tuo)，洗(xi)(xi)脫(tuo)液(ye)(ye)出現3個蛋白峰(feng)(feng)，酶活(huo)性(xing)(xing)峰(feng)(feng)與(yu)蛋白峰(feng)(feng)第(di)(di)3峰(feng)(feng)重疊，其余2個蛋白峰(feng)(feng)基本無(wu)酶活(huo)性(xing)(xing)，收(shou)集活(huo)性(xing)(xing)部(bu)分(fen)(fen)即為(wei)蚯(qiu)蚓纖(xian)溶(rong)酶純酶；

     步驟四、蚯蚓纖溶酶的修飾：加入蚯蚓纖溶酶純酶和活化的PEG到15mL，pH9.2，0.1mol/L的硼酸緩沖液中，純酶與PEG的重量比是1:50，在30℃下，保溫反應1小時，反應物對0.1mol/L，pH7.3的磷酸緩沖液透析過夜，透析液再以10000r/min，4℃離心l0min， 取上清液過柱Sephadex G75，收集活性成分，即為蚯蚓纖溶酶修飾酶；

 

步(bu)驟(zou)五(wu)、蚯(qiu)蚓纖溶(rong)酶(mei)凍(dong)(dong)(dong)干(gan)(gan)粉(fen)的(de)制(zhi)備：將(jiang)蚯(qiu)蚓纖溶(rong)酶(mei)修飾酶(mei)裝(zhuang)在樣(yang)品盤里(li)，料厚不超過8mm，放進真空(kong)冷(leng)凍(dong)(dong)(dong)干(gan)(gan)燥(zao)(zao)機設備干(gan)(gan)燥(zao)(zao)室內進行凍(dong)(dong)(dong)干(gan)(gan)，于-35℃冷(leng)凍(dong)(dong)(dong)12小(xiao)時，然后在5pa的(de)真空(kong)度下，升溫至30℃，干(gan)(gan)燥(zao)(zao)12小(xiao)時；繼續(xu)升溫至40℃，真空(kong)干(gan)(gan)燥(zao)(zao)14小(xiao)時，得(de)到蚯(qiu)蚓纖溶(rong)酶(mei)修飾酶(mei)的(de)凍(dong)(dong)(dong)干(gan)(gan)粉(fen)，其含水量為(wei)7.0%，蛋白含量為(wei)68%，酶(mei)活力為(wei)1700U/mg。

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